RNA Keeper – Capacidade 100mL – NOVA BIOTECNOLOGIA

O RNA Keeper é um reagente aquoso utilizado para a conservação de tecidos. Este produto é atóxico e tem a capacidade de penetrar rapidamente nos tecidos para estabilizar e proteger o RNA celular em amostras frescas. É importante que as amostras de tecido sejam colocadas no RNA Keeper imediatamente após a sua obtenção para garantir a qualidade do RNA que será posteriormente purificado. Este produto é especialmente útil para preservar amostras de RNA, protegendo-as da degradação durante o armazenamento e transporte para análises posteriores. No entanto, é importante notar que o RNA Keeper não é recomendado para a conservação de sangue total, plasma ou soro, pois pode formar um precipitado insolúvel devido ao elevado conteúdo proteico desses fluidos.

• O RNA Keeper é um reagente aquoso para conservação de tecidos, é atóxico e penetra rapidamente nos tecidos para estabilizar e proteger, in situ, o RNA celular das amostras frescas. As amostras dos tecidos para conservação devem ser colocadas no RNA Keeper imediatamente após a sua obtenção, isto irá garantir a qualidade do RNA a ser purificado.
• O RNA Keeper elimina a necessidade de processar os tecidos imediatamente, ou seu congelamento em gelo seco para posterior processamento.
• O RNA Keeper preserva o RNA nos tecidos por até 1 dia em 37°C, 1 semana em 25°C e até um mês em 4°C. Os tecidos podem ainda ser armazenados em -20°C por longo período de tempo.
• O RNA Keeper vem sendo testado; com sucesso, em diversos tecidos de espécies de vertebrados, a saber, cérebro, coração, rins, baço, fígado, testículos, músculo esquelético,gordura, pulmões e timus.
• RNA Keeper é também eficiente para E. coli, Drosophila, cultivo celular de tecidos, células sanguíneas da sériebrancas e alguns vegetais.
• O RNA Keeper é compatível com a maioria de métodos de extração de RNA, incluindo o Brazol e diversos kits de extração de RNA, comercialmente disponíveis.

Precauções e Cuidados:

• Este produto é para uso exclusivo em pesquisa, não é indicado como medicamento, nem pode servir para uso doméstico.

Armazenamento e Estabilidade:

• Armazenar o RNA Keeper em temperatura ambiente. Em caso de precipitação é possível aquecer a solução em 37°C, agitando para redissolver e deixar a solução translúcida.

Utilização:

• Utilizar o RNA Keeper somente com tecidos frescos. Não congelar os tecidos antes de fazer a imersão no RNA Keeper.

Preparação das amostras de tecidos:

1. Tecido animal: Amostras de tecidos devem ser picotadas nas dimensões aproximadas de 0,5 cm (p.e. 0,5 cm x 1 x 1 cm). Estas amostras devem ser colocadas em 5 volumes de RNA Keeper e armazenar como indicado na seção B, a seguir. O reagente não dissolve ou rompe os tecidos nelesubmersos. Órgãos pequenos, como p.e. fígado de rato, rins, e baço podem ser armazenados completamente no RNA Keeper.
2. Tecido vegetal: Os tecidos vegetais podem ser diretamente submersos em 5 volumes de RNA Keeper para sua conservação. Tecidos mais resistentes devem ser previamente submetidos a métodos mecânicos para ruptura.
3. Cultivos celulares: Preparar um “pellet” com as células em cultivo, de acordo com procedimentos padrão pré-estabelecidos. Lavar as células com solução de PBS ou equivalente para retirar algum resíduo de meio de cultivo. Suspender as células em volume pequeno de PBS para levemente reidratar as células e adicionar então 5-10 volumes de RNA Keeper para as células em suspensão. Muitas vezes não é necessário enxaguar repetidas vezes as células.
4. Células sanguíneas brancas: As células sanguíneas brancas podem ser recuperadas através de protocolos de separação utilizando diversos reagentes, entre os quais o SepCell e proceder no armazenamento como nos cultivos celulares. O RNA Keeper não é recomendado para a conservação do sangue total, plasma ou soro, pois, por causa do elevado conteúdo protéico estes fluidos poder formar um precipitado insolúvel se misturados com o RNA Keeper.
5. Bactérias: O RNA Keeper é um poderoso bacteriostático, isto significa que as bactérias não crescem nesta solução, porém se mantém intactas. As células de E.coli armazenadas em RNA Keeper por um mês entre 2°C – 8°C ficam intacta se mantém seu RNA preservado.

Armazenamento das amostras em RNA Keeper:

1. Armazenamento em -80°C (recomendado para armazenamento por longo período de tempo). Incubar as amostras entre 2-8°C durante a noite, no outro dia remover o tecido da solução, antes de armazenar a -80°c, para prevenir a formação de cristais de sal. Para células de cultivo de tecidos, não remover o RNA Keeper, simplesmente congelar a solução completa.
2. Armazenamento das amostras em -20°C (outra opção para armazenamento durante longoperíodo de tempo) Incubar as amostras entre 2-8°C durante a noite, logo no outro dia, transferir para -20°C. Embora alguns cristais se formem no tampão de armazenamento, isto não afetará o isolamento do RNA que será posteriormente realizado. Se os cristais são um problema, recomenda-se remover o RNA Keeper antes de armazenar as amostras em -20°C. as amostras podem ser subsequentemente congeladas e descongeladas sem afetar a qualidade do RNA a ser extraído.
3. Armazenamento entre 2-8°C. As amostras podem ser armazenadas entre 2-8°C por até um mês sem evidência experimental de degradação do RNA.
4. Armazenamento em temperatura ambiente (25°C). O RNA isolado de amostras armazenadas em 25°C por uma semana fica intacto, já o RNA armazenado por duas semanas em 25°C aparece levemente degradado, assim para alguns ensaios se torna inviável. É possível manter em gelo as amostras em RNA Keeper por umas quantas horas antes de armazenar em temperatura ambiente.
5. Armazenamento em 37°C. O RNA isolado de amostras armazenadas em 37°C aparece intacto por até 24 horas após a incubação, mas parcialmente degradada após o terceiro dia de incubação.

Isolamento de RNA em tecidos conservados em RNA Keeper:

• Os tecidos armazenados no RNA Keeper devem ser removidos da solução com pinças estéreis esubmersos na solução de lise correspondente. A homogeneização dos tecidos deve ser rápida.
• As células armazenadas em RNA Keeper podem ser removidas por centrifugação retirando o sobrenadante; ou diretamente submetidas ao processo de extração considerando uma solução de células/RNA Keeper.
• Centrifugação: como o RNA Keeper tem densidade maior em comparação com os meios de cultivo de células, se recomendaconhecer a velocidade de centrifugação para cada tipo celular, para HeLa p.e. se recomenda 3.000 g.
• Para extração com reagente a base de fenol (Brazol p.e.) se recomenda adicionar 10 volumes do reagente para extração e prosseguir como indicado no protocolo.

Armazenamento:

• Entre 4°C e 30°C.