Brasílica (Kit para extração de DNA genômico, baseado no uso de resina) – NOVA BIOTECNOLOGIA

• Brasílica utiliza uma metodologia simples e rápida para extração e purificação de DNA a partir de amostras biológicas.
• Metodologia simples e rápida de extração e purificação de DNA a partir de amostras biológicas (sangue total, soro, plasma, bactérias e tecidos vegetais).
• A metodologia utiliza Isocianato de Guanidina e ligação covalente do DNA em partículas de sílica.

Componentes:

• Tubos com tampão de lise e resina brasílica (L1).
• 1 Frasco contendo 95 mL do tampão de lavagem (L2).
• 1 Frasco contendo 95 mL do tampão de lavagem(L3).
• 1 Frasco contendo 95 mL do tampão de lavagem (L4).
• 4 Tubos contendo o tampão de eluição (E1).

Protocolo básico:

1. Homogeneizar o tubo contendo o tampão L1 (vôrtex por 10 s).
2. Adicionar 100µL de amostra no tubo com o tampão L1 (vôrtex por 10 s).
3. Deixar o tubo em temperatura ambiente por 10 min agitando periodicamente a cada minuto.
4. Agitar novamente no vôrtex durante 10 seg.
5. Centrifugar a 10.000g durante 30 seg.
6. Descartar o sobrenadante (preferencialmente por sucção, sem remover o precipitado).
7. Lavar o precipitado adicionado 900µL do tampão L2, dissolvendo o pellet através de repetidas pipetagens, e novamente centrifugar a 10.000g durante 30 seg.
8. Descartar o sobrenadante, sem remover o precipitado.
9. Lavar novamente o precipitado adicionando 900µL do tampão L2, dissolvendo o pellet através de repetidas pipetagens e centrifugar a 10.000g durante 30 seg.
10. Descartar o sobrenadante, sem remover o precipitado.
11. Lavar o precipitado adicionando 900µL do tampão L3, dissolvendo o pellet através de repetidas pipetagens e centrifugar a 10.000 g durante 30 seg.
12. Descartar o sobrenadante, sem remover o precipitado.
13. Lavar novamente o precipitado adicionando 900µL do tampão L3, dissolvendo o pellet através de repetidas pipetagens e centrifugar a 10.000g durante 30 seg.
14. Lavar o precipitado adicionando 900µL do tampão L4, dissolvendo o pellet através de repetidas pipetagens e centrifugar a 10.000g durante 30 seg.
15. Descartar o sobrenadante, sem remover o precipitado.
16. Lavar novamente o precipitado adicionando 900µL do tampão L4, dissolvendo o pellet através de repetidas.
17. Pipetagens e centrifugar a 10.000 g durante 30 seg.
18. Deixar secar o pellet a 56°C por 10 min com a tampa do tubo aberta (estufa ou termobloco).
19. Adicionar 100µL do tampão de eluição (E1) ao precipitado.
20. Com leves movimentos descolar o precipitado do fundo do tubo e deixar por mais 10 min a 56°C, desta vez com a tampa do tubo fechada.
21. Centrifugar por 10 min a 12.000g.
22. Retirar o sobrenadante e transferir para novo tubo, pois aqui estarão os ácidos nucléicosextraídos.
23. Utilizar o material obtido em procedimentos de biologia molecular, como amplificação por PCR.
24. Verificar a presença dos ácidos nucléicos através de eletroforese em géis de agarose corados com brometo de etídeo ou blue Green loading dye, analisando sob luz ultravioleta ou quantificar emespectrofotômetro.
25. Para eliminar algum resto de resina nesta etapa, centrifugar novamente a 12.000 g durante 30seg.

Armazenamento:

• Temperatura Ambiente.