AQ97 High Fidelity DNA Polymerase 2x Master Mix (2x and 1.5 mM MgCl2)

• A AQ97 High Fidelity DNA Polymerase 2x master mix é uma alternativa conveniente à AQ97 High Fidelity DNA Polymerase, exibindo os seguintes recursos; destacando a alta fidelidade com capacidade de amplificação em até 60x Taq DNA Polymerase, amplificação rápida devido à sua alta taxa de extensão, capacidade de amplificar alvos difíceis de DNA, como aqueles com baixo a alto conteúdo de GC e capacidade de realizar amplificação em alvos de DNA longos.
• Esses recursos permitem resultados de PCR precisos e confiáveis.
• O domínio de ligação ao DNA desta polimerase, garante excelente alta fidelidade, capacidade de longo alcance e também resultados de amplificação rápidos.
• A AQ97 High Fidelity DNA Polymerase 2x Master Mix é uma mistura de reação 2x pronta para usar composta por AQ97 High Fidelity DNA Polymerase e um sistema de tampão otimizado incluindo dNTPs e cloreto de magnésio, recomendada para aplicações que requerem uma fidelidade extremamente alta, como clonagem/subclonagem, aplicações de sequenciamento de última geração (NGS), análise de SNP e mutagênese.
• A AQ97 DNA polimerase high fidelity exibe tanto a atividade de 5 ‘→ 3’ DNA polimerase quanto a atividade de exonuclease de revisão 3 ‘→ 5’, permitindo que a polimerase corrija as incompatibilidades de pares de bases.
• Para alvos maiores que 11 kb, recomendamos o uso de AQ97 DNA polimerase de alta fidelidade com capacidade de amplificar alvos de DNA de até 18 kb. Para amplicons difíceis, como amostras de DNA ricas em GC, aqueles com estruturas secundárias complexas ou amplicons longos, a adição 1–2 M Betaine Enhancer Solution é recomendada.

Características:

• 2x Master Mix principal pronto para uso, para maior comodidade.
• Configuração de reação para economia de tempo.
• Alta fidelidade: > 60x Taq Fidelity.
• Atividade de revisão da 3’ → 5’ exonuclease.
• Alta taxa de alongamento: 10 s/kb.
• Capacidade de longo alcance: 11 kb gDNA.
• Boa cobertura em modelos de DNA com baixo a alto conteúdo de GC.

Fidelidade:

• A fidelidade de uma polimerase refere-se à sua capacidade de inserir a base correta durante a PCR. Pelo contrário, a taxa de incorporação incorreta é conhecida como taxa de erro de polimerases. A fidelidade depende da polimerase, do sistema tampão em uso e da qualidade do DNA modelo.

• Os valores de fidelidade de AQ97 High Fidelity DNA Polymerase , AccuPol DNA polimerase, DNA polimerase P de alta fidelidade e DNA polimerase Q de alta fidelidade foram comparados com o valor de fidelidade da Taq DNA polimerase (1x).

Taxas de Erro:

• A) Erros por base por duplicação. Os desvios padrão são dados em (). As taxas de erro apresentadas podem não ser comparáveis às apresentadas em outros lugares devido a diferenças técnicas e metódicas.
• B) As taxas de erro para a AQ97 High Fidelity DNA Polymerase e também para as duas DNA polimerases de High Fidelity P e Q ficaram abaixo do limite de detecção para o método usado. Este limite é estimado em 8.4 x 10-6 erros por base por duplicação (60 x fidelidade Taq).

• Distribuição de erros de substituição.
• A PCR foi realizada usando Taq DNA Polimerase, AQ97 DNA Polimerase High Fidelity, DNA Polimerase Q de alta fidelidade e DNA Polimerase P. de alta fidelidade. A PCR foi seguida por sequenciamento NGS dos produtos de PCR.
• O número de substituições em cada posição alvo de PCR foi calculado e plotado no diagrama A.
• As substituições incluem nucleotídeos incorporados incorretamente e deleções em cada posição. Erros de não polimerase são subtraídos do número total de erros para revelar erros verdadeiros de polimerase.
• Erros de não polimerase incluem mutações causadas por danos de DNA induzidos por termociclagem, preparação de amostra pré-NGS e erros de sequenciamento.
• Nestes diagramas, o número médio de substituições para Taq DNA polimerase (média Taq) e para AQ97 DNA polimerase high fidelity (média AQ97) também é representado graficamente.
• O diagrama B amplia a área próxima ao limite de detecção, exibindo mais informações sobre o número de substituições para AQ97 DNA polimerase de alta fidelidade, DNA polimerase Q de alta fidelidade e DNA polimerase P. de alta fidelidade.