Acrigel – Solução de Acrilamida/Bis-Acrilamida 29:1 (40%) – Capacidade 500mL – NOVA BIOTECNOLOGIA
A Acrigel – Solução de Acrilamida/Bis-Acrilamida 29:1 (40%) é um produto químico frequentemente utilizado em laboratórios de bioquímica e biologia molecular, especialmente para a realização de eletroforese de proteínas e ácidos nucleicos (como o DNA). Vamos entender um pouco mais sobre os seus componentes e usos:
- Acrilamida: É um monômero que, quando polimerizado, forma uma matriz de gel. É incolor, inodora e altamente solúvel em água. A acrilamida é usada principalmente para formar géis de poliacrilamida, que são usados em diversas técnicas de análise bioquímica.
- Bis-Acrilamida: Funciona como um agente reticulante que liga cadeias de acrilamida juntas, formando uma rede tridimensional mais estável. A proporção de 29:1 significa que existem 29 partes de acrilamida para cada parte de bis-acrilamida na solução.
- Concentração de 40%: Indica a concentração da solução total de acrilamida e bis-acrilamida. Uma solução a 40% é bastante concentrada e geralmente é diluída para a concentração desejada antes de usar em experimentos.
- Uso em Eletroforese: Estes géis são usados para separar moléculas com base no tamanho e na carga, como parte da eletroforese. Por exemplo, na eletroforese de proteínas, as moléculas menores migram mais rapidamente através do gel do que as maiores, permitindo sua separação e análise.
- Precauções: É importante notar que a acrilamida é uma substância neurotóxica e potencialmente carcinogênica antes de polimerizar. Portanto, é necessário manipulá-la com cuidado, usando equipamento de proteção adequado.
Em resumo, a Acrigel – Solução de Acrilamida/Bis-Acrilamida 29:1 (40%) é uma mistura utilizada em laboratórios para criar géis de poliacrilamida usados em várias técnicas de análise molecular e bioquímica. Devido às suas propriedades tóxicas, é fundamental seguir as diretrizes de segurança ao manipulá-la.
- Matriz para a separação eletroforética de ácidos nucléicos e de proteínas.
- Solução pronta-para-uso na preparação de géis de poliacrilamida utilizados na identificação de fragmentos de ácidos nucléicos e pronteínas.
- A eletroforese dos ácidos nucléicos é comumente realizada em géis de poliacrilamida, em concentrações que variam entre 4 a 20%.
- Solução de acrilamida: bis – acrilamida, pronta para uso.
- A eletroforese de proteínas nucléicos é comumente realizada em géis de poliacrilamida, em concentrações que variam entre 4 a 20%. A formação desta matriz (gel de poliacrilamida) é dependente da copolimerização dos radicais livres da acrilamida e ligadores, chamados, cross-linkers como a N, N-methylene, bis – acrylamide (Bis -acrilamida).
- A proporção entre acrilamida e bis – acrilamida determina o tamanho do poro do gel, que se deseja utilizar, o que em última instância, idealmente, separa as moléculas aplicadas (p.e. proteínas são geralmente separadas utilizando proporções entre 29:1 até 37,5:1, sendo que um raio de 19:1 é comumente utilizado para sequenciamento de DNA ou para separação de proteínas).
- Quanto maior o tamanho dos pares de bases a ser separado, maior o tamanho do poro necessário, consequentemente menor a porcentagem de Acrilamida a ser utilizada.
- Para eletroforese de DNA ou RNA fita simples, tradicionalmente o AcriGel 19:1 é utilizado juntamente com porcentagens de ureia nos géis.
- A solução pronta-para-uso Acrigel – Solução de Acrilamida/Bis-Acrilamida 29:1 (40%) é utilizada para formular géis nativos, que não contém ureia, para a eletroforese de ácidos nucléicos de fita dupla.
Armazenamento:
- Entre 2°C e 8°C.
Procedimento de preparação de géis de Poliacrilamida com a solução AcriGel 29:1 pronta-para-uso:
- Calcular o volume de AcriGel necessário para fazer o gel (utilizar a tabela a seguir) considerando as fórmulas ao lado.
- Perfazer o volume final com os tampões de rotina e completar com água ultrapura.
- Colocar a solução em Erlenmeyer tipo kitasato, para favorecer a retirada de ar com auxílio de bomba de vácuo. Na maioria dos casos o AcriGel polimerizará mesmo sem retirar o ar, no entanto, para melhores resultados quanto à reprodutibilidade, aconselha-se retirar o ar durante 5 minutos agitando com auxílio de barra magnética.
- Adicionar 1,0 mL APS (Persulfato de amônio) em solução a 10% para cada 100 mL de solução para gel.
- Misturar os componentes da solução para homogeneizar e, adicionar 20 µL de TEMED para cada 100 mL de solução.
- Aplicar a mistura nas placas para polimerização (casting cassette).
- Os géis polimerizados poderão ser utilizados em até 48 horas sem detrimento de sua eficiência.
