Agarose grau técnico genético (GTG) é uma agarose “Low Melting Temperature” utilizada na separação por eletroforese de fragmentos de ácidos nucléicos entre 100 a 23.000 pb.
Especificações Analíticas:
Temperatura de polimerização (gel 4%): 26°C-30°C.
Temperatura de fusão (Melting temperature) (gel 1,5%): ≤ 65°C.
Sensibilidade (gel 4%): ≥200 g/cm².
Aplicações:
Separação de fragmentos acima de 1.000 pb.
Manipulação enzimática direta de DNA.
Separação e recuperação de fragmentos de DNA de tamanhos muito grandes.
Concentrações da Agarose-GTG sugeridas:
Mobilidade do corante:
Taxa de migração de DNA fita dupla em relação ao azul de bromo fenol e ao xileno cianol em géis de agarose-GTG.
Precauções no uso e na preparação:
Quando estiver realizando a fusão da agarose-GTG em temperaturas elevadas, observar cuidados para evitar queimaduras no operador e nas pessoas próximas.
Utilizar sempre proteção para os olhos quando dissolver a agarose-GTG.
Instruções de preparação do gel de agarose em forno de micro-ondas:
Utilizar um béquer de 2 a 4 vezes maior em volume do que a solução de agarose-GTG a ser preparada.
Pesar a quantidade de agarose-GTG em pó necessário para a preparação do gel de interesse.
Adicionar o tampão de eletroforese 1X ou 0.5X e misturar com auxílio de barra e agitador magnéticos dentro de um béquer.
Retirar a barra magnética, principalmente se essa não for de teflon.
É recomendável deixar a agarose-GTG no tampão por 5 minutos antes de colocar para aquecer. Este procedimento diminui a tendência da agarose provocar pequenas explosões durante o aquecimento.
Cobrir o béquer com folha plástica (wrap plastic), cuidando para fazer alguns furos para ventilação e para não explodir quando em ebulição.
Ferver a agarose por aproximadamente um minuto e, retirar com muito cuidado da fonte de calor utilizando luvas de proteção.
Deixar esfriar a solução entre 50°C a 60°C antes de colocar no suporte de acrílico.
Esvaziar o conteúdo dentro de um suporte de plástico com o pente e deixar polimerizar.