Kit para extração e purificação de DNA com colunas de Sílica com as apresentações de 50 extrações – NOVA BIOTECNOLOGIA
Os kits de extração de DNA são usados para isolar e purificar DNA de amostras biológicas. Eles simplificam e padronizam o processo de extração de DNA, tornando-o mais eficiente e confiável. As etapas principais incluem:
- Romper as células: Para liberar o DNA das células da amostra.
- Separar o DNA: De outros componentes celulares, como proteínas e lipídios.
- Purificar o DNA: Usando colunas de purificação ou outras técnicas para remover impurezas.
- Coletar o DNA purificado: Em uma forma adequada para análises posteriores, como PCR e sequenciamento.
Os kits de extração de DNA contêm todos os reagentes e materiais necessários para essas etapas, garantindo que o DNA extraído seja de alta qualidade e pronto para uso em diversas aplicações de biologia molecular.
- Os reagentes para extração e purificação de DNA, emprega colunas de sílica (cartuchos/filtros).
- O seu uso é recomendado para amostras de sangue total, plasma, soro, culturas de células, urina, amostra de coleta de swab nasofaríngeas.
- O material genético extraído e purificado estará pronto para ser utilizado em kits de biologia molecular como PCR, RT-PCR, RT-qPCR disponíveis no mercado.
Características:
- Os reagentes para extração de DNA é um sistema genérico que utiliza a tecnologia de colunas de sílica com capacidade de ligação para isolamento e purificação de DNA de amostras de sangue total, plasma, soro, culturas de células, urina, amostras de coleta de swabs nasofaríngeas para procedimentos de diagnóstico in vitro.
Composição dos Reagentes:
- 1 Frasco de Hemalise-RBC 10X – Capacidade 9mL.
- 1 Frasco de Tampão de Lise – Capacidade 20mL.
- 1 Frasco de Solução de Lavagem A – Capacidade 30mL
- 1 Frasco de Solução de Lavagem B – Capacidade 30mL.
- 1 Frasco de Tampão de Eluição – Capacidade 5mL.
- 50 Colunas de Sílica.
- 50 Tubos coletores.
Especificações:
- Os reagentes para extração do DNA oferecem uma extração em coluna de sílica com excelente rendimento.
- Uso recomendado com matrizes biológicas respiratórias, sangue e meios de transporte.
- O DNA extraído poderá ser utilizado em técnicas de biologia molecular, incluindo reação em cadeia da polimerase quantitativa (PCR, qPCR).
Equipamentos, reagentes e insumos não fornecidos:
- Centrífuga – 20.000 x g (14.000 rpm).
- Micropipetas e ponteiras de 1-10µL – 100-1000µL.
- Agitador tipo Vórtex.
- Bloco de aquecimento, Banho Maria, Banho seco ou estufa, para incubação em 56°C.
- Etanol absoluto (95-100%).
- Microtubos de 1,5mL e 2mL.
- Tubos graduados, tipo Falcon (15mL e 50mL).
- Luvas descartáveis.
Preparo de Reagente:
- Tampão de Lise, Tampão de Lavagem A e B e tampão de eluição: reagentes prontos-para-uso, indicar a data do primeiro uso.
Preparo de Hemalise na concentração 1X:
- Para cada amostra serão necessário 1,8 mL de solução de Hemalise 1X.
- Diluir 1:10 a solução de Hemalise-RBC 10X em água ultrapura, sendo 1 parte de Hemalise-RBC 10X e 9 partes de água ultrapura, deixando na concentração 1X.
Armazenamento e Transporte:
- Os componentes podem ser transportados em temperatura ambiente (10° a 30°C) e são estáveis até a data de validade descrita na embalagem.
- O tampão de lise e o Tampão de Lavagem A podem exibir precipitados devido às baixas temperaturas. Se isso ocorrer, aquecer o frasco em temperaturas entre 55°C a 65°C homogeneizando ocasionalmente até a dissolução completa.
Validade:
- Os reagentes para Extração e Purificação de DNA tem validade de 12 meses quando mantidos fechados e armazenados corretamente.
Informação de Segurança:
- Os reagentes para Extração e Purificação de DNA devem ser utilizados somente por pessoal técnico qualificado e devidamente treinado.
- Todo o pessoal envolvido na execução do ensaio deve utilizar equipamentos de proteção individual. Além disso, todos devem ser treinados em procedimentos de biossegurança, como recomendado pela legislação em vigor.
- O ambiente do laboratório deve ser controlado, a fim de evitar contaminantes como poeira ou agentes microbianos transportados pelo ar.
- Após o recebimento dos reagentes, verificar se as embalagens dos componentes estão danificadas ou se há vazamento dos líquidos. Proteger-se adequadamente e caso seja necessário realizar a reclamação correspondente.
- Não utilizar componentes danificados, pois eles podem gerar baixo rendimento.
- Não trocar os componentes diferentes, se não forem do mesmo lote.
- Não utilizar os reagentes para Extração e Purificação de DNA após a data de validade apresentada na etiqueta externa.
- Armazenar os químicos e plásticos em condições próprias para uso em laboratório.
- Para minimizar risco de contaminações é recomendado trabalhar em cabine de fluxo laminar.
- Evitar contaminação cruzada das amostras utilizando ponteiras descartáveis e trocando-as após cada pipetagem. Utilizar ponteiras com filtro.
- Evitar contaminação cruzada entre os reagentes dos reagentes utilizando ponteiras descartáveis e trocando-as após cada pipetagem. Utilizar ponteiras com filtro.
Procedimento:
- Sangue total, soro, plasma, urina, cultura de células, amostra de coleta de swab nasofaríngeas, podem ser processados com os reagentes de extração de DNA em coluna.
- Para uma purificação satisfatória é importante obter material homogêneo, limpo e não viscoso antes de carregar as colunas. Desta forma, é importante verificar a existência de precipitados em todas as amostras (especialmente amostras antigas e congeladas).
Preparação das Amostras:
- Os reagentes para extração de DNA foram desenvolvidos para purificação a partir de 200µL de amostras de sangue total, soro, plasma, cultura de células. Para amostras nasofaríngeas a partir de 300µL. Para amostras de urina centrifugar 2mL para uso do pellet.
Amostra de Sangue total (pré-tratamento):
- Em microtubo de 2 mL, adicionar 200 µL de sangue total com anticoagulante.
- A seguir, adicionar 1,8 mL de solução de hemalise 1X.
- Inverter o microtubo por 10 vezes para homogeneizar a solução de hemalise.
- Incubar a temperatura ambiente por 10 minutos.
- Centrifugar o microtubo a 20.000 x g (14.000 rpm) durante 3 minutos.
- Desprezar o máximo possível do sobrenadante pipetando no lado oposto do pellet.
- Seguir para o Protocolo Geral.
Amostra de urina (pré-tratamento):
- Em um microtubo de 2 mL adicionar 2 mL de urina.
- Centrifugar a 20.000 x g (14.000 rpm) durante 5 minutos.
- Desprezar o máximo possível do sobrenadante pipetando no lado oposto do pellet.
- Seguir para o Protocolo Geral.
Protocolo Geral:
- Em um microtubo de 2 mL com a amostra (volume sugerido no item 6.1), adicionar 400 µL do Tampão de Lise.
- Vortexar o microtubo por 15 segundos.
- Centrifugar rapidamente para remover as gotas de líquido da tampa do microtubo.
- Incubar a temperatura ambiente por 10 minutos.
- Adicionar ao mesmo microtubo 200 µL de Etanol Absoluto (Não fornecido). Homogeneizar imediatamente por inversão. NOTA: a homogeneização deve ser imediata para evitar qualquer precipitação irregular do DNA devido as altas concentrações do etanol.
- Vortexar o microtubo por 15 segundos.
- Centrifugar rapidamente para remover as gotas de líquido da tampa do microtubo.
- Transferir os 600 µL da amostra preparada na coluna de sílica já acoplada ao tubo coletor.
- NOTA: Não descartar o volume restante da amostra preparada (aproximadamente 500µL).
- Fechar a tampa da coluna de sílica e centrifugar a 6.000 x g (8.000 rpm) durante 1 minuto.
- Descartar o líquido do tubo coletor e acoplar novamente a coluna de sílica.
- Se necessário repetir o item 8 e 9, caso tenha ficado o preparo da amostra no microtubo.
- Adicionar 600 µL do Tampão de Lavagem A na coluna de sílica já acoplada ao tubo coletor.
- Fechar a tampa da coluna de sílica e centrifugar a 6.000 x g (8.000 rpm) durante 1 minuto.
- Descartar o líquido do tubo coletor e acoplar novamente a coluna de sílica.
- Adicionar 600 µL do Tampão de Lavagem B na coluna de sílica já acoplada ao tubo coletor.
- Fechar a tampa da coluna de sílica e centrifugar a 20.000 x g (14.000 rpm) durante 3minutos.
- Descartar o líquido do tubo coletor e acoplar novamente a coluna de sílica.
- Centrifugar novamente a 20.000 x g (14.000 rpm) durante 1 minuto para remover completamente a solução de lavagem.
- Transferir a coluna de sílica para um microtubo de 1,5 mL.
- Aplicar 100 µL do Tampão de Eluição diretamente a membrana de sílica.
- Incubar a temperatura ambiente por 2 minutos.
- Fechar a tampa da coluna de sílica e centrifugar a 6.000 x g (8.000 rpm) durante 1 minuto.
- Manter o DNA eluido a -20°C para armazenamento e/ou transporte ou utilizá-lo imediatamente.
Controle de Qualidade:
