Kit para Detecção e Endotoxinas LAL – 50 Reações 0,250 UE/mL – NOVA BIOTECNOLOGIA
- O LAL-KIT DE DETECÇÃO DE ENDOTOXINAS utiliza um método sensível para a detecção destas endotoxinas bacterianas.
- Os testes com o LAL-Kit de detecção de endotoxinas, com formação de coágulo de gel em ampola, são a maneira mais econômica de testar as endotoxinas presentes em soluções e demais amostras líquidas.
- Este reagente apresenta sensibilidade de 0,250 UE/mL.
- Os pirógenos mais potentes e mais amplamente conhecidos são as Endotoxinas ou Lipopolissacarídeos (LPS), que são componentes das paredes celulares de bactérias Gram-negativas.
Uso pretendido:
- Os testes com o LAL-Kit de detecção de endotoxinas, com formação de coágulo de gel em ampola, são a maneira mais econômica de testar as endotoxinas presentes em soluções e demais amostras líquidas.
- Este reagente apresenta sensibilidade de 0,250 UE/mL.
- Os pirógenos mais potentes e mais amplamente conhecidos são as Endotoxinas ou Lipopolissacarídeos (LPS), que são componentes das paredes celulares de bactérias Gram-negativas.
- O LAL-KIT DE DETECÇÃO DE ENDOTOXINAS utiliza um método sensível para a detecção destas endotoxinas bacterianas.
- Este produto é de uso EXCLUSIVO PARA ENSAIOS IN VITRO.
Composição do Kit (suficiente para 50 testes):
- 50 ampolas- LAL Liofilizado – acondicionadas em 5 cartelas de 10 ampolas cada.
- 60 mL de Água reagente LAL.
- 1 frasco de vidro – Controle Padrão Positivo de Endotoxina – Cepa bacteriana E. coli O111:B4 (20 UE/vial).
Princípio geral do ensaio:
- O Lisado de Amebócito de Limulus (LAL) é um extrato aquoso dos amebócitos circulantes do caranguejo-ferradura (Tachypleus tridentatus). O lisado contém uma cascata de enzimas serino-proteases que podem ser ativadas por Endotoxinas bacterianas.
- As Endotoxinas ativam as pró-enzimas para produzir enzimas ativas (denominadas coagulases), esta última ativa ainda mais o coagulogênio na coagulina externa; coagulina auto-associa-se ao coágulo gelatinoso.
- Quando a concentração de Endotoxina é alta o suficiente, o gel formado é firme e permanece intacto após a inversão dos tubos de teste, o resultado do teste é classificado como positivo.
- Um resultado positivo indica que a concentração de Endotoxina da amostra de teste é maior ou igual à sensibilidade marcada para o kit (0,250 UE/mL).
- Se um gel intacto não se forma, o resultado do teste é classificado como negativo, indicando que a concentração de Endotoxina do espécime de teste é menor que a sensibilidade rotulada (0,250 UE/mL).
Modo de Uso:
- Este é um teste único aonde as amostras são adicionadas diretamente às ampolas prontas para uso.
- Os usuários deste teste de endotoxina não precisam de mais reagentes, pois o ensaio é realizado em uma única etapa.
- O método é simples, conveniente, sem a necessidade de outros equipamentos.
Parâmetros do produto:
- Sensibilidade: 0,250 UE/mL.
- Volume de amostra: 0,1 mL (100µL) por teste.
Reagentes fornecidos:
- Ampolas com superfície destacável para cada teste individual.
- Controle Padrão Positivo de Endotoxina – Cepa bacteriana E. coli O111:B4 (20 UE/vial).
- Água reagente LAL serve como controle negativo e para diluição do CP.
Materiais e equipamentos necessários, não fornecidos:
- Pipetas endotoxin-free, 0,2 mL, 1,0 mL, 5,0 mL, ou pipetadores automáticos com ponteiras endotoxin-free.
- Termo-bloco ou banho de água sem circulação nem movimento, ou estufa bacteriológica (37°C +/- 1°C).
- Parafilm ou papel alumínio.
- Suporte para ampolas.
Amostras, controles e preparação dos ensaios:
- Toda a vidraria, plásticos e diluentes em contato com as amostras devem ser endotoxin-free.
- Vidraria e outros equipamentos resistentes à elevada temperatura devem ser despirogenizados em forno, utilizando processos validados para este propósito.
- Considerar o protocolo que utiliza a fornagem dos materiais durante 60 minutos à 250°C.
- Utilizar técnicas de assepsia durante todo o processo.
Preparação das amostras para o teste:
- A partir deste momento utilizar luvas descartáveis sem talco.
- As amostras a serem testadas devem ser armazenadas em ambiente isento de contaminantes.
- O espécime poderá ser mantido entre 2°C e 8°C para armazenamento temporário (menos de 24 horas).
- Para armazenamento por maior tempo, a amostra deve ser mantida abaixo de -10°C
Preparação de Controles (Padrão Positivo de Endotoxina):
- Reconstituir o Controle Padrão Positivo de Endotoxina com 10mL de água reagente LAL (concentração final de 2UE/mL).
- Adicionar os 10mL de água reagente LAL diretamente no frasco.
- Agitar de forma homogênea e firme, cuidando para não deslocar a tampa e não abrir a tampa do frasco. Agitar até completa dissolução.
Preparação de Controles (Negativo de Endotoxina):
- Usar água reagente LAL como controle negativo de endotoxina.
Procedimento de cada teste:
- Para cada ampola de teste, adicionar 0,1 mL (100µL) de amostra,
- Para a ampola correspondente ao controle negativo, adicionar 0,1 mL (100µL) de água reagente LAL.
- Para a ampola correspondente ao controle positivo, adicionar 0,1 mL (100µL) de CP de Endotoxina.
- Misturar suavemente com movimentos circulares, cada ampola com as amostras.
- Colocar papel de alumínio ou parafilm na parte superior de cada ampola.
- Incubar a mistura a 37°C durante 60 minutos, em Banho Maria estável, Banho seco ou em Estufa bacteriológica.
- Evitar completa e totalmente vibrações durante o processo de incubação.
ATENÇÃO: A falta de mistura adequada é uma causa de ensaios insatisfatórios.
Obs.: Se número maior de amostras for testada em paralelo, os testes devem ser agrupados e iniciados em intervalos que permitam a visualização do resultado de cada amostra dentro do limite de tempo (60 minutos).
Visualização e interpretação dos Resultados:
- Remover as ampolas da incubação.
- Inverter cada ampola a 180° em um movimento suave.
- Interpretar os resultados de acordo com as tabelas a seguir:
Fontes potenciais de variabilidade:
- Pipetagem, calibração de pipetas e equipamentos, qualidade das amostras.
Armazenamento:
- Armazenar entre 2 a 8˚C quando fechado.
- Após aberto armazenar entre 2 a 8˚C, mesmo após reconstituição.
Validade:
- O KIT DE DETECÇÃO DE ENDOTOXINAS LAL tem validade de 24 meses quando mantido fechado/aberto, porém armazenado corretamente (2 a 8˚C).
Informação de Segurança:
- Sempre que estiver trabalhando com soluções químicas e amostras biológicas, EPIs são necessários conforme normas de segurança regulamentadas.
- Depois de receber o produto verificar se as embalagens estão danificadas ou se hávazamento.
- Produto de uso apenas laboratorial e deverá ser armazenado em condições próprias para uso em laboratório.
- Contaminações causadas pelos resíduos são raríssimas, mas não podem ser completamente descartadas. Portanto, os resíduos devem ser considerados como material infeccioso e devem ser manuseados de acordo com as normas de segurança regulamentadas.