Vamos entender como age o Ágar Hektoen? Qual a sua função, preparação e Guia de Compras
O ágar Hektoen entérico (HE) é um meio de cultura para o isolamento de Shigella e Salmonella . Baseia-se no uso de sais biliares para inibição seletiva e dois sistemas indicadores: azul de bromotimol e fucsina ácida como indicadores de dissimilação de carboidratos e ferro férrico como indicador da formação de sulfeto de hidrogênio a partir de tiossulfato.
O Ágar Hektoen (ou Hektoen Enteric Agar) é um meio de cultura seletivo e diferencial utilizado principalmente para o isolamento e identificação de bactérias entéricas, como Salmonella e Shigella, a partir de amostras clínicas, alimentares e de água. Ele foi desenvolvido com o objetivo de facilitar a diferenciação de organismos entéricos patogênicos que podem causar infecções intestinais, como enterocolites.
Características principais do Ágar Hektoen:
- Meio seletivo: Contém componentes, como o oxalato de bile de sódio, que inibem o crescimento de bactérias Gram-positivas e outras bactérias não patogênicas do intestino, permitindo o crescimento de bactérias entéricas Gram-negativas.
- Meio diferencial: Possui indicadores de pH e substratos fermentáveis (lactose, sacarose e salicina) que permitem a diferenciação de bactérias fermentadoras e não fermentadoras de carboidratos:
- Bactérias fermentadoras de lactose, como Escherichia coli, produzem colônias alaranjadas ou amarelas, devido à fermentação dos açúcares.
- Bactérias não fermentadoras, como Salmonella e Shigella, formam colônias esverdeadas ou transparentes.
- A produção de gás sulfídrico (H₂S), característica de algumas cepas de Salmonella, resulta em colônias com centro preto.
- Indicadores de pH: O azul de bromotimol e a fucsina ácida são utilizados como indicadores de pH, mudando de cor de acordo com a fermentação dos carboidratos no meio. As bactérias que fermentam carboidratos acidificam o meio, levando à formação de colônias coloridas.
- Detecção de H₂S: Componentes como o tiossulfato de sódio e o citrato de amônio férrico possibilitam a detecção da produção de gás sulfídrico por algumas bactérias, como a Salmonella, que forma precipitados negros nas colônias.
Aplicações:
O ágar Hektoen é amplamente utilizado em:
- Microbiologia clínica para o diagnóstico de doenças entéricas causadas por Salmonella e Shigella.
- Controle de qualidade de alimentos e na análise de água, para identificar possíveis contaminações por essas bactérias patogênicas.
Ele facilita o isolamento e a identificação de patógenos gastrointestinais em amostras fecais e outros tipos de amostras, sendo um meio eficiente para a triagem inicial desses microrganismos.
Composição do Ágar Hektoen
O ágar Hektoen é um meio de cultura seletivo e diferencial, usado principalmente para o isolamento de bactérias entéricas, como Salmonella e Shigella, a partir de amostras clínicas e alimentares. Sua composição é projetada para inibir o crescimento de bactérias Gram-positivas e diferenciar colônias de bactérias fermentadoras e não fermentadoras de lactose, além de identificar a produção de gás sulfídrico.
Aqui está a composição típica do Ágar Hektoen:
- Peptona: 12,0 g
- Extrato de levedura: 3,0 g
- Lactose: 12,0 g
- Sacarose: 12,0 g
- Salicina: 2,0 g
- Bile oxalato de sódio: 9,0 g (agente seletivo que inibe Gram-positivos)
- Cloreto de sódio: 5,0 g
- Tiossulfato de sódio: 5,0 g (para produção de H₂S)
- Citrato de amônio férrico: 1,5 g (detecção de H₂S)
- Azul de bromotimol: 0,064 g (indicador de pH)
- Fucsina ácida: 0,1 g (indicador de pH)
- Ágar: 15,0 g (agente solidificante)
- pH final: 7,5 ± 0,2
Os corantes (azul de bromotimol e fucsina ácida) permitem a diferenciação entre colônias fermentadoras e não fermentadoras, mudando de cor conforme a fermentação dos açúcares presentes.
Essa formulação permite que bactérias fermentadoras de lactose, como Escherichia coli, formem colônias de cor alaranjada, enquanto bactérias não fermentadoras, como Shigella e Salmonella, produzem colônias incolores ou esverdeadas. Salmonella também pode produzir precipitados negros devido à produção de gás sulfídrico (H₂S)
Para que serve o Ágar Hektoen?
O Ágar Hektoen (HE) é um meio seletivo e diferencial projetado para isolar e diferenciar membros das espécies Salmonella e Shigella de outras Enterobacteriaceae. Os sais biliares e os corantes azul de bromotimol e fucsina ácida inibem o crescimento da maioria dos organismos Gram positivos. Lactose, sacarose e salicina fornecem carboidratos fermentáveis para estimular o crescimento e a diferenciação de entéricos.
O tiossulfato de sódio fornece uma fonte de enxofre. O citrato de amônio férrico fornece uma fonte de ferro para permitir a produção de sulfeto de hidrogênio a partir de tiossulfato de sódio, que fornece uma fonte de enxofre. O citrato de amônio férrico também permite a visualização da produção de sulfeto de hidrogênio reagindo com gás sulfeto de hidrogênio para formar um precipitado preto.
Os entéricos que fermentam um ou mais dos carboidratos produzirão colônias amarelas a salmão. Os não fermentadores produzirão colônias azul-esverdeadas. Organismos que reduzem enxofre a sulfeto de hidrogênio produzirão colônias pretas ou colônias azul-esverdeadas com um centro preto.
O Ágar Hektoen é um meio diferencial moderadamente seletivo usado para o isolamento e cultura de microrganismos entéricos gram-negativos, particularmente para o isolamento de espécies de Shigella e Salmonella de amostras fecais (flora mista).
Por que é tão importante?
Dadas as graves implicações para a saúde associadas a infecções por Salmonella e Shigella, a detecção rápida e precisa destes patógenos é de suma importância. O Ágar Hektoen, com suas características distintas, torna-se uma escolha preferencial para laboratórios clínicos e de pesquisa.
Características do Ágar Hektoen:
- Seletividade: A presença de sais biliares e antibióticos inibe o crescimento de bactérias Gram-positivas e outras bactérias Gram-negativas não desejadas.
- Diferenciação: Os indicadores de pH e os carboidratos incorporados permitem a diferenciação com base na fermentação. Bactérias como Salmonella e Shigella produzem colônias com características de cor e aparência distintas.
Preparação do Ágar Hektoen
Suspenda os componentes, pó seco, em água (72,66 gramas em 1000 ml de água purificada/destilada). O meio é fervido por alguns segundos até que os ingredientes estejam completamente dissolvidos. Não autoclave ou superaqueça .
Resfrie a 47°C e despeje em placas de Petri. O pH final deve ser 7,5 + 0,2.
Dicas
- Procedência: Certifique-se de adquirir o Ágar Hektoen de fornecedores confiáveis que sigam padrões de qualidade e boas práticas de fabricação.
- Validade: Verifique sempre a data de validade no rótulo do produto. Um meio de cultura vencido pode comprometer a precisão dos resultados.
- Armazenamento: Siga as recomendações do fabricante quanto ao armazenamento, garantindo que o meio mantenha suas características ideais até o uso.
Conclusão
O Ágar Hektoen é uma ferramenta indispensável para laboratórios que buscam precisão na detecção de patógenos entéricos. Ao adquirir esse meio, é crucial prestar atenção à qualidade, procedência e cuidados de armazenamento para garantir resultados confiáveis.
Esperamos que este guia tenha fornecido informações valiosas sobre o Ágar Hektoen e orientado de forma eficaz os futuros compradores. A microbiologia é uma área em constante evolução e, com as ferramentas certas, podemos avançar ainda mais no estudo e combate a doenças infecciosas.
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