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O que é  Teste de tetrazólio? Qual a Importância desse Teste para a Germinação?

 

 

 

Você já ouviu falar sobre o Teste de Tetrazólio? Se não, você está perdendo uma das técnicas mais importantes no mundo da agricultura e horticultura. Este teste pode determinar a viabilidade das sementes antes de plantá-las, economizando tempo e dinheiro para os produtores. Se você quer saber mais sobre como funciona este método incrível, continue lendo!

A produção e a utilização de sementes de alta qualidade são fatores básicos da maior importância para o sucesso da cultura da soja. Para que tais requisitos sejam alcançados, o sistema de controle de qualidade na indústria de sementes deve ser ágil, versátil e confiável, fornecendo resultados precisos e de maneira rápida.

Princípio do Teste de tetrazólio

O teste de tetrazólio é um método de teste de germinação utilizado para determinar a porcentagem de sementes viáveis. Ele é realizado pela imersão das sementes em uma solução de água e tetrazólio durante 24 horas, seguido da remoção das sementes e da contagem das que permanecerem verdes.

O teste de tetrazólio é útil para determinar a viabilidade das sementes, bem como para avaliar e controlar a qualidade de lotes de sementes. Com este método, pode-se estimar o valor comercial dos lotes, pois as sementes perdidas significam menos produtividade na colheita.

O teste de tetrazólio também pode ser usado para avaliar o potencial germinativo e a viabilidade das sementes, assim como para determinar se uma semente está pronta para plantio. O teste de tetrazólio baseia-se na atividade das enzimas desidrogenases
as quais catalizam as reações respiratórias nas mitocôndrias, durante a glicólise e o ciclo de Krebs.

Estas enzimas, particularmente a desidrogenase do ácido málico, reduzem o sal de tetrazólio (2,3,5-trifenil cloreto de tetrazólio ou TCT) nos tecidos vivos.Quando a semente de soja é imersa na solução incolor de TCT, esta é difundida através dos tecidos, ocorrendo nas células vivas a reação de redução que resulta na formação de um composto vermelho, estável e não-difusível, conhecido por trifenilformazan:

Quando o Tetrazólio  é reduzido, formando o trifenilformazan, isto indica que há atividade respiratória nas mitocôndrias, significando que há viabilidade celular e do tecido.

Portanto, a coloração resultante da reação é uma indicação positiva da viabilidade através da detecção da respiração a nível celular. Tecidos não viáveis não reagem e conseqüentemente não são coloridos.

Sendo o tecido vigoroso, haverá a formação de um vermelho carmin claro; se o tecido está em deterioração, um vermelho mais intenso será formado, em virtude da maior intensidade de difusão da solução de TCT pelas membranas celulares comprometidas de tais tecidos; se o mesmo é não viável, a redução do sal não ocorrerá, e o tecido morto contrastará como branco (não colorido) com o tecido colorido viável.

A observação de tais diferenças de cor, juntamente com o conhecimento de diversas características das sementes, permitem a determinação da presença, da localização e da natureza dos distúbios que podem ocorrer nos tecidos embrionários.

Por que é importante fazer o teste de tetrazólio?

O teste de tetrazólio é importante porque ele permite determinar o estado fisiológico das sementes. As sementes podem estar em diferentes estágios de maturação e, portanto, o teste de tetrazólio pode fornecer informações valiosas sobre a qualidade das sementes. Além disso, este teste também pode ser útil para diagnosticar problemas nas sementes, como a presença de fungos ou bactérias.

Em suma, o teste de tetrazólio é importante porque fornece informações valiosas sobre a qualidade das sementes. Isso permite que os agricultores e jardineiros tomem decisões informadas sobre quais sementes comprar e quando plantá-las para obter melhores resultados.

Para a realização do teste de tetrazólio  é necessário o seguinte

O teste de tetrazólio é um teste que avalia a qualidade fisiológica das sementes de soja. Ele é realizado comparando-se o teor de água das sementes com o teor de água do ar em uma determinada temperatura.

Para realizar o teste, as sementes devem ser colocadas em um recipiente e submetidas a uma temperatura específica por algumas horas. O recipiente é conectado a um medidor de umidade que registrará o teor de água das sementes durante o período de tempo determinado.

Depois disso, as sementes são retiradas do recipiente e colocadas em outro com tetrazólio, que é um reagente químico sensível à umidade. Em seguida, a mesma temperatura utilizada anteriormente é aplicada novamente nas sementes por mais algumas horas.

Após esse processo, os grãos que não absorveram água permanecerão brancos e aqueles que absorveram mostrarão tonalidades rosa suave. Assim, é possível avaliar a qualidade fisiológica das sementes de soja.

  • reagente: sal de tetrazólio: 2,3,5-trifenil cloreto de tetrazólio, normalmente comercializado em frascos com 10 g;
  •  vidraria: placas de Petri;  becker ,  frasco  reagente de vidro  âmbar, para armazenar a solução de tetrazólio, que é fotossensível e se reduz com a luz.
  • lâmina de barbear;
  • Câmara de Germinação de sementes tipo bod

Câmara de Germinação de Plantas e Sementes com Fotoperído e Alternância de Temperatura

A Câmara de Germinação ou Câmara Germinadora é um equipamento indispensável nos laboratórios de sementes, plantas, laboratórios de entomologia entre outros.

Este equipamento também chamado de Incubadora  BOD com Alternância e Fotoperíodo com  proporciona um ambiente que simula a luz do dia quanto a luz da noite propiciando um ambiente perfeito para a germinação das sementes .

  • lupa com luminária ou lupa para sementes 5X com iluminação fluorescente, de preferência circular;
  • refrigerador para  para armazenagem das amostras;
  • papel de germinação.

não utilizar frascos metálicos, para evitar redução da solução de tetrazólio em trifenilformazan.

Preparo da Solução de Tetrazólio

Recomenda-se utilizar solução  de tetrazólio na concentração de 0,075%, pois a mesma permite uma coloração adequada das sementes, permitindo a visualização com maior precisão de danos mecânicos recentes, causados por abrasão, que normalmente não seriam detectados com o uso de soluções mais concentradas (0,5 a 1,0%), conforme sugerido na literatura internacional.

Além disso, a utilização de solução nessa concentração é mais econômica: com um vidro de 10 g de TCT pode-se testar a viabilidade de até 200 lotes de semente, utilizando a solução a 0,075%. Caso a solução utilizada tivesse a concentração de 1,0%, apenas 15 amostras poderiam ser avaliadas com 10 g do sal.

Prepara-se, inicialmente, a solução estoque a 1,0%, misturando 10,0 g do sal de tetrazólio em 1,0 litro de água destilada.

Esta solução deve ser armazenada em frasco de vidro de cor âmbar, em local escuro e fresco, de preferência na geladeira.

Quando necessário, prepara-se a solução de trabalho a 0,075%, que também deve ser armazenada com os mesmos cuidados da solução estoque: 1,0 litro de solução a 0,075% = 75 ml solução estoque (1,0%) + 925 ml de H2O.

A água utilizada no preparo da solução de trabalho pode ser destilada ou
da rede de abastecimento, desde que apresente o pH entre 6 e 7, e não seja
salobra.

Preparo das Sementes

A amostra de trabalho deve ser representativa do lote e coletada conforme
prescrito pelas Regras para Análise de Sementes (RAS; Brasil, 1992).

Número de Sementes
Para o teste de germinação (em areia ou rolo de papel) as RAS recomendam a utilização de 400 sementes por amostra, (8 sub-amostras com 50 sementes
cada). Para o teste de tetrazólio é sugerida a utilização de 100 sementes (2 subamostras com 50 sementes cada), conforme sugerido pela AOSA (1983), Moore (1973), França Neto (1981) e França Neto et al. (1985; 1988).

A necessidade de um menor número de sementes para o teste de tetrazólio
é devida às condições homogêneas a que são submetidas todas as sementes
durante o seu preparo, o que, normalmente, não ocorre durante a execução do teste padrão de germinação.

Os resultados desse último teste podem ser afetados por diversos fatores: gradientes de umidade e temperatura comumente encontrados nos germinadores; diferenças do pH e da textura do papel; variação na quantidade de água adicionada ao substrato; e a presença de fungos, como Phomopsis spp. e Fusarium semitectum nas sementes testadas.

Pré-condicionamento

As sementes devem ser embaladas em papel de germinação umedecido
e mantidas nestas condições por um período de 16 horas, na temperatura de 25ºC. Para evitar a perda de umidade, as embalagens devem permanecer em câmara úmida, ou seja, em saco plástico, em germinador ou em dessecador com água em lugar de sílica-gel.

Os tegumentos de sementes escuras de soja normalmente não permitem
a difusão da solução de tetrazólio. Portanto, os mesmos devem ser removidos das sementes antes do processo de coloração.

Caso haja a necessidade de maior rapidez, pode-se utilizar a metodologia
alternativa, sugerida por Costa et al. (1998), realizando-se o pré-condicionamento por 6 horas a uma temperatura de 41ºC, o que representa um ganho de 10 horas no preparo das sementes, sem que haja perda de precisão dos resultados.

Coloração

Após o pré-condicionamento, as sementes são colocadas em copo becker  sendo totalmente submersas na solução de tetrazólio (0,075%). As sementes devem permanecer assim a uma temperatura de 35ºC a 40ºC por aproximadamente 150 a 180 minutos. Esta temperatura pode ser obtida utilizando-se uma estufa incubadora.

Lavagem da Amostra

Alcançada a coloração ideal, as sementes são retiradas do ambiente a 35ºC – 40o C e são, em seguida, lavadas com água comum e devem ser mantidas submersas em água até o momento a avaliação. Caso as amostras não sejam avaliadas de imediato, devem ser mantidas em refrigerador, por até 12 horas.

Conclusão

Os resultados do teste de tetrazólio são divididos em três categorias: positivo, negativo e inconclusivo. Uma resposta positiva indica que a semente está viva e germinará quando plantada. Uma resposta negativa indica que a semente está morta e não germinará. Infelizmente, às vezes o teste é inconclusivo, o que significa que não há maneira de determinar se a semente está viva ou morta.

Apesar de não utilizar equipamentos e reagentes caros, o teste requer que o analista de sementes seja bem treinado nas técnicas do teste. É básico o conhecimento das estruturas anatômicas da semente pelo analista. Experiência, imaginação e julgamento crítico são também necessários para que o analista possa visualizar os tipos de anormalidades de plântulas que são revelados pelo teste de tetrazólio.

A precisão do teste depende do conhecimento de todas as técnicas e procedimentos envolvidos. O teste de tretrazólio  pode ser aplicado em todas as etapas do sistema de produção de sementes, visando aprimorar o controle de qualidade, ou seja, na colheita, na recepção, antes e após o beneficiamento e a secagem, durante o armazenamento e antes da semeadura.

 

 

Precisando fazer o teste de trazólio? Nos consulte.

Fonte: Embrapa

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