Kit para Detecção e Endotoxinas LAL – 50 Reações 0,125 UE/mL – NOVA BIOTECNOLOGIA

• O LAL-KIT DE DETECÇÃO DE ENDOTOXINAS utiliza um método sensível para a detecção destas endotoxinas bacterianas.
• Os testes com o LAL-Kit de detecção de endotoxinas, com formação de coágulo de gel em ampola, são a maneira mais econômica de testar as endotoxinas presentes em soluções e demais amostras líquidas.
• Este reagente apresenta sensibilidade de 0,125 UE/mL.
• Os pirógenos mais potentes e mais amplamente conhecidos são as Endotoxinas ou Lipopolissacarídeos (LPS), que são componentes das paredes celulares de bactérias Gram-negativas.

Uso pretendido:

• Os testes com o LAL-Kit de detecção de endotoxinas, com formação de coágulo de gel em ampola, são a maneira mais econômica de testar as endotoxinas presentes em soluções e demais amostras líquidas.
• Este reagente apresenta sensibilidade de 0,125 UE/mL.
• Os pirógenos mais potentes e mais amplamente conhecidos são as Endotoxinas ou Lipopolissacarídeos (LPS), que são componentes das paredes celulares de bactérias Gram-negativas.
• O LAL-KIT DE DETECÇÃO DE ENDOTOXINAS utiliza um método sensível para a detecção destas endotoxinas bacterianas.
• Este produto é de uso EXCLUSIVO PARA ENSAIOS IN VITRO.

Composição do Kit (suficiente para 50 testes):

• 50 ampolas- LAL Liofilizado – acondicionadas em 5 cartelas de 10 ampolas cada.
• 60 mL de Água reagente LAL.
• 1 frasco de vidro – Controle Padrão Positivo de Endotoxina – Cepa bacteriana E. coli O111:B4 (20 UE/vial).

Princípio geral do ensaio:

• O Lisado de Amebócito de Limulus (LAL) é um extrato aquoso dos amebócitos circulantes do caranguejo-ferradura (Tachypleus tridentatus). O lisado contém uma cascata de enzimas serino-proteases que podem ser ativadas por Endotoxinas bacterianas.
• As Endotoxinas ativam as pró-enzimas para produzir enzimas ativas (denominadas coagulases), esta última ativa ainda mais o coagulogênio na coagulina externa; coagulina auto-associa-se ao coágulo gelatinoso.
• Quando a concentração de Endotoxina é alta o suficiente, o gel formado é firme e permanece intacto após a inversão dos tubos de teste, o resultado do teste é classificado como positivo.
• Um resultado positivo indica que a concentração de Endotoxina da amostra de teste é maior ou igual à sensibilidade marcada para o kit (0,125 UE/mL).
• Se um gel intacto não se forma, o resultado do teste é classificado como negativo, indicando que a concentração de Endotoxina do espécime de teste é menor que a sensibilidade rotulada (0,125 UE/mL).

Modo de Uso:

• Este é um teste único aonde as amostras são adicionadas diretamente às ampolas prontas para uso.
• Os usuários deste teste de endotoxina não precisam de mais reagentes, pois o ensaio é realizado em uma única etapa.
• O método é simples, conveniente, sem a necessidade de outros equipamentos.

Parâmetros do produto:

• Sensibilidade: 0,125 UE/mL.
• Volume de amostra: 0,1 mL (100µL) por teste.

Reagentes fornecidos:

• Ampolas com superfície destacável para cada teste individual.
• Controle Padrão Positivo de Endotoxina – Cepa bacteriana E. coli O111:B4 (20 UE/vial).
• Água reagente LAL serve como controle negativo e para diluição do CP.

Materiais e equipamentos necessários, não fornecidos:

• Pipetas endotoxin-free, 0,2 mL, 1,0 mL, 5,0 mL, ou pipetadores automáticos com ponteiras endotoxin-free.
• Termo-bloco ou banho de água sem circulação nem movimento, ou estufa bacteriológica (37°C +/- 1°C).
• Parafilm ou papel alumínio.
• Suporte para ampolas.

Amostras, controles e preparação dos ensaios:

• Toda a vidraria, plásticos e diluentes em contato com as amostras devem ser endotoxin-free.
• Vidraria e outros equipamentos resistentes à elevada temperatura devem ser despirogenizados em forno, utilizando processos validados para este propósito.
• Considerar o protocolo que utiliza a fornagem dos materiais durante 60 minutos à 250°C.
• Utilizar técnicas de assepsia durante todo o processo.

Preparação das amostras para o teste:

• A partir deste momento utilizar luvas descartáveis sem talco.
• As amostras a serem testadas devem ser armazenadas em ambiente isento de contaminantes.
• O espécime poderá ser mantido entre 2°C e 8°C para armazenamento temporário (menos de 24 horas).
• Para armazenamento por maior tempo, a amostra deve ser mantida abaixo de -10°C

Preparação de Controles (Padrão Positivo de Endotoxina):

1. Reconstituir o Controle Padrão Positivo de Endotoxina com 10mL de água reagente LAL (concentração final de 2UE/mL).
2. Adicionar os 10mL de água reagente LAL diretamente no frasco.
3. Agitar de forma homogênea e firme, cuidando para não deslocar a tampa e não abrir a tampa do frasco. Agitar até completa dissolução.

Preparação de Controles (Negativo de Endotoxina):

• Usar água reagente LAL como controle negativo de endotoxina.

Procedimento de cada teste:

• Para cada ampola de teste, adicionar 0,1 mL (100µL) de amostra,
• Para a ampola correspondente ao controle negativo, adicionar 0,1 mL (100µL) de água reagente LAL.
• Para a ampola correspondente ao controle positivo, adicionar 0,1 mL (100µL) de CP de Endotoxina.
• Misturar suavemente com movimentos circulares, cada ampola com as amostras.
• Colocar papel de alumínio ou parafilm na parte superior de cada ampola.
• Incubar a mistura a 37°C durante 60 minutos, em Banho Maria estável, Banho seco ou em Estufa bacteriológica.
• Evitar completa e totalmente vibrações durante o processo de incubação.

ATENÇÃO: A falta de mistura adequada é uma causa de ensaios insatisfatórios.

Obs.: Se número maior de amostras for testada em paralelo, os testes devem ser agrupados e iniciados em intervalos que permitam a visualização do resultado de cada amostra dentro do limite de tempo (60 minutos).

Visualização e interpretação dos Resultados:

• Remover as ampolas da incubação.
• Inverter cada ampola a 180° em um movimento suave.
• Interpretar os resultados de acordo com as tabelas a seguir:

Fontes potenciais de variabilidade:

• Pipetagem, calibração de pipetas e equipamentos, qualidade das amostras.

Armazenamento:

• Armazenar entre 2 a 8˚C quando fechado.
• Após aberto armazenar entre 2 a 8˚C, mesmo após reconstituição.

Validade:

• O KIT DE DETECÇÃO DE ENDOTOXINAS LAL tem validade de 24 meses quando mantido fechado/aberto, porém armazenado corretamente (2 a 8˚C).

Informação de Segurança:

• Sempre que estiver trabalhando com soluções químicas e amostras biológicas, EPIs são necessários conforme normas de segurança regulamentadas.
• Depois de receber o produto verificar se as embalagens estão danificadas ou se hávazamento.
• Produto de uso apenas laboratorial e deverá ser armazenado em condições próprias para uso em laboratório.
• Contaminações causadas pelos resíduos são raríssimas, mas não podem ser completamente descartadas. Portanto, os resíduos devem ser considerados como material infeccioso e devem ser manuseados de acordo com as normas de segurança regulamentadas.