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Você já ouviu falar sobre o Teste de Tetrazólio? Se não, você está perdendo uma das técnicas mais importantes no mundo da agricultura e horticultura. Este teste pode determinar a viabilidade das sementes antes de plantá-las, economizando tempo e dinheiro para os produtores. Se você quer saber mais sobre como funciona este método incrível, continue lendo!
A produção e a utilização de sementes de alta qualidade são fatores básicos da maior importância para o sucesso da cultura da soja. Para que tais requisitos sejam alcançados, o sistema de controle de qualidade na indústria de sementes deve ser ágil, versátil e confiável, fornecendo resultados precisos e de maneira rápida.
O teste de tetrazólio é um método de teste de germinação utilizado para determinar a porcentagem de sementes viáveis. Ele é realizado pela imersão das sementes em uma solução de água e tetrazólio durante 24 horas, seguido da remoção das sementes e da contagem das que permanecerem verdes.
O teste de tetrazólio é útil para determinar a viabilidade das sementes, bem como para avaliar e controlar a qualidade de lotes de sementes. Com este método, pode-se estimar o valor comercial dos lotes, pois as sementes perdidas significam menos produtividade na colheita.
O teste de tetrazólio também pode ser usado para avaliar o potencial germinativo e a viabilidade das sementes, assim como para determinar se uma semente está pronta para plantio. O teste de tetrazólio baseia-se na atividade das enzimas desidrogenases
as quais catalizam as reações respiratórias nas mitocôndrias, durante a glicólise e o ciclo de Krebs.
Estas enzimas, particularmente a desidrogenase do ácido málico, reduzem o sal de tetrazólio (2,3,5-trifenil cloreto de tetrazólio ou TCT) nos tecidos vivos.Quando a semente de soja é imersa na solução incolor de TCT, esta é difundida através dos tecidos, ocorrendo nas células vivas a reação de redução que resulta na formação de um composto vermelho, estável e não-difusível, conhecido por trifenilformazan:
Quando o Tetrazólio é reduzido, formando o trifenilformazan, isto indica que há atividade respiratória nas mitocôndrias, significando que há viabilidade celular e do tecido.
Portanto, a coloração resultante da reação é uma indicação positiva da viabilidade através da detecção da respiração a nível celular. Tecidos não viáveis não reagem e conseqüentemente não são coloridos.
Sendo o tecido vigoroso, haverá a formação de um vermelho carmin claro; se o tecido está em deterioração, um vermelho mais intenso será formado, em virtude da maior intensidade de difusão da solução de TCT pelas membranas celulares comprometidas de tais tecidos; se o mesmo é não viável, a redução do sal não ocorrerá, e o tecido morto contrastará como branco (não colorido) com o tecido colorido viável.
A observação de tais diferenças de cor, juntamente com o conhecimento de diversas características das sementes, permitem a determinação da presença, da localização e da natureza dos distúbios que podem ocorrer nos tecidos embrionários.
O teste de tetrazólio é importante porque ele permite determinar o estado fisiológico das sementes. As sementes podem estar em diferentes estágios de maturação e, portanto, o teste de tetrazólio pode fornecer informações valiosas sobre a qualidade das sementes. Além disso, este teste também pode ser útil para diagnosticar problemas nas sementes, como a presença de fungos ou bactérias.
Em suma, o teste de tetrazólio é importante porque fornece informações valiosas sobre a qualidade das sementes. Isso permite que os agricultores e jardineiros tomem decisões informadas sobre quais sementes comprar e quando plantá-las para obter melhores resultados.
O teste de tetrazólio é um teste que avalia a qualidade fisiológica das sementes de soja. Ele é realizado comparando-se o teor de água das sementes com o teor de água do ar em uma determinada temperatura.
Para realizar o teste, as sementes devem ser colocadas em um recipiente e submetidas a uma temperatura específica por algumas horas. O recipiente é conectado a um medidor de umidade que registrará o teor de água das sementes durante o período de tempo determinado.
Depois disso, as sementes são retiradas do recipiente e colocadas em outro com tetrazólio, que é um reagente químico sensível à umidade. Em seguida, a mesma temperatura utilizada anteriormente é aplicada novamente nas sementes por mais algumas horas.
Após esse processo, os grãos que não absorveram água permanecerão brancos e aqueles que absorveram mostrarão tonalidades rosa suave. Assim, é possível avaliar a qualidade fisiológica das sementes de soja.
A Câmara de Germinação ou Câmara Germinadora é um equipamento indispensável nos laboratórios de sementes, plantas, laboratórios de entomologia entre outros.
Este equipamento também chamado de Incubadora BOD com Alternância e Fotoperíodo com proporciona um ambiente que simula a luz do dia quanto a luz da noite propiciando um ambiente perfeito para a germinação das sementes .
não utilizar frascos metálicos, para evitar redução da solução de tetrazólio em trifenilformazan.
Recomenda-se utilizar solução de tetrazólio na concentração de 0,075%, pois a mesma permite uma coloração adequada das sementes, permitindo a visualização com maior precisão de danos mecânicos recentes, causados por abrasão, que normalmente não seriam detectados com o uso de soluções mais concentradas (0,5 a 1,0%), conforme sugerido na literatura internacional.
Além disso, a utilização de solução nessa concentração é mais econômica: com um vidro de 10 g de TCT pode-se testar a viabilidade de até 200 lotes de semente, utilizando a solução a 0,075%. Caso a solução utilizada tivesse a concentração de 1,0%, apenas 15 amostras poderiam ser avaliadas com 10 g do sal.
Prepara-se, inicialmente, a solução estoque a 1,0%, misturando 10,0 g do sal de tetrazólio em 1,0 litro de água destilada.
Esta solução deve ser armazenada em frasco de vidro de cor âmbar, em local escuro e fresco, de preferência na geladeira.
Quando necessário, prepara-se a solução de trabalho a 0,075%, que também deve ser armazenada com os mesmos cuidados da solução estoque: 1,0 litro de solução a 0,075% = 75 ml solução estoque (1,0%) + 925 ml de H2O.
A água utilizada no preparo da solução de trabalho pode ser destilada ou
da rede de abastecimento, desde que apresente o pH entre 6 e 7, e não seja
salobra.
A amostra de trabalho deve ser representativa do lote e coletada conforme
prescrito pelas Regras para Análise de Sementes (RAS; Brasil, 1992).
Número de Sementes
Para o teste de germinação (em areia ou rolo de papel) as RAS recomendam a utilização de 400 sementes por amostra, (8 sub-amostras com 50 sementes
cada). Para o teste de tetrazólio é sugerida a utilização de 100 sementes (2 subamostras com 50 sementes cada), conforme sugerido pela AOSA (1983), Moore (1973), França Neto (1981) e França Neto et al. (1985; 1988).
A necessidade de um menor número de sementes para o teste de tetrazólio
é devida às condições homogêneas a que são submetidas todas as sementes
durante o seu preparo, o que, normalmente, não ocorre durante a execução do teste padrão de germinação.
Os resultados desse último teste podem ser afetados por diversos fatores: gradientes de umidade e temperatura comumente encontrados nos germinadores; diferenças do pH e da textura do papel; variação na quantidade de água adicionada ao substrato; e a presença de fungos, como Phomopsis spp. e Fusarium semitectum nas sementes testadas.
As sementes devem ser embaladas em papel de germinação umedecido
e mantidas nestas condições por um período de 16 horas, na temperatura de 25ºC. Para evitar a perda de umidade, as embalagens devem permanecer em câmara úmida, ou seja, em saco plástico, em germinador ou em dessecador com água em lugar de sílica-gel.
Os tegumentos de sementes escuras de soja normalmente não permitem
a difusão da solução de tetrazólio. Portanto, os mesmos devem ser removidos das sementes antes do processo de coloração.
Caso haja a necessidade de maior rapidez, pode-se utilizar a metodologia
alternativa, sugerida por Costa et al. (1998), realizando-se o pré-condicionamento por 6 horas a uma temperatura de 41ºC, o que representa um ganho de 10 horas no preparo das sementes, sem que haja perda de precisão dos resultados.
Após o pré-condicionamento, as sementes são colocadas em copo becker sendo totalmente submersas na solução de tetrazólio (0,075%). As sementes devem permanecer assim a uma temperatura de 35ºC a 40ºC por aproximadamente 150 a 180 minutos. Esta temperatura pode ser obtida utilizando-se uma estufa incubadora.
Alcançada a coloração ideal, as sementes são retiradas do ambiente a 35ºC – 40o C e são, em seguida, lavadas com água comum e devem ser mantidas submersas em água até o momento a avaliação. Caso as amostras não sejam avaliadas de imediato, devem ser mantidas em refrigerador, por até 12 horas.
Os resultados do teste de tetrazólio são divididos em três categorias: positivo, negativo e inconclusivo. Uma resposta positiva indica que a semente está viva e germinará quando plantada. Uma resposta negativa indica que a semente está morta e não germinará. Infelizmente, às vezes o teste é inconclusivo, o que significa que não há maneira de determinar se a semente está viva ou morta.
Apesar de não utilizar equipamentos e reagentes caros, o teste requer que o analista de sementes seja bem treinado nas técnicas do teste. É básico o conhecimento das estruturas anatômicas da semente pelo analista. Experiência, imaginação e julgamento crítico são também necessários para que o analista possa visualizar os tipos de anormalidades de plântulas que são revelados pelo teste de tetrazólio.
A precisão do teste depende do conhecimento de todas as técnicas e procedimentos envolvidos. O teste de tretrazólio pode ser aplicado em todas as etapas do sistema de produção de sementes, visando aprimorar o controle de qualidade, ou seja, na colheita, na recepção, antes e após o beneficiamento e a secagem, durante o armazenamento e antes da semeadura.
Precisando fazer o teste de trazólio? Nos consulte.
Fonte: Embrapa
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