AQ97 High Fidelity DNA Polymerase (2U/µl with 5x AQ97 Buffer)
- A AQ97 High Fidelity DNA Polymerase é uma nova DNA polimerase de revisão desenvolvida e criada pela Ampliqon.
- A AQ97 High Fidelity DNA Polymerase é composta de uma nova DNA polimerase quimérica com ancestralidade Archaeal, fundida a um domínio de ligação de DNA que aumenta a processabilidade.
- Juntamente com a amplificação muito rápida e robusta de alvos complexos e longos, AQ97 High Fidelity DNA Polimerase exibe uma alta fidelidade garantindo uma amplificação precisa.
- A AQ97 High Fidelity DNA Polymerase é adequada para experimentos de PCR que requerem amplificação com taxas de erro muito baixas, como clonagem/subclonagem, aplicações de sequenciamento de última geração (NGS), análise de SNP e mutagênese.
Características:
- Alta fidelidade: >60x Taq Fidelity.
- Alta taxa de amplificação: 10 seg/kb.
- Atividade de revisão 3’→5’ exonuclease.
- Capacidade de longo alcance: 18 kb for gDNA.
- Boa cobertura em amostras de DNA com baixa ou alta quantidade de GC.
- AQ97 High Fidelity DNA Polymerase exibe ambas atividades de revisão, atividade DNA polimerase 5’→3′, e atividade exonuclease 3’→5′, permitindo que está polimerase corrija incompatibilidades de pares de bases. O Kit AQ97 High Fidelity DNA Polymerase é composto por tampão 5x AQ97 Buffer permitindo uma amplificação robusta com alvos de DNA com baixa ou alta quantidade de GC ou alvos longos de DNA. O Kit também inclui um tubo extra de MgCl2 concentrado em 25 mM, para ajuste no PCR caso necessário.
- Para amplificações difíceis, como em amostras de DNA ricos em GC, essas com estruturas secundárias complexas ou longas amplificações, recomenda-se adicionar a solução 1-2 M Betaine Enhance.
- Para maior conveniência do manuseio AQ97 High Fidelity DNA Polymerase também disponível em 2x master mix.
Fidelidade:
- A fidelidade da polymerase refere-se a habilidade de inserção da base correta durante o PCR. Ao contrário, a taxa de micro incorporação é conhecida como taxa de erro.
- A fidelidade depende polimerase, o sistema de tampão em uso e a qualidade da amostra de DNA.
Aq97 High Fidelity Dna Polymerase Promove Rubusta Amplificação:
Fidelidade:
- Os valores de fidelidade de AQ97 High Fidelity, AccuPol DNA Polymerase, high fidelity DNA polymerase P and high fidelity DNA polymerase Q foram comparados com o valor de fidelidade da Taq DNA polimerase (1x).
Taxas de Erros
- A) Erros por base por duplicação. Os desvios padrão são dados em (). As taxas de erro apresentadas podem não ser comparáveis às apresentadas em outros lugares devido a diferenças técnicas e metódicas.
- B) As taxas de erro para a AQ97 High Fidelity DNA Polymerase e também para as duas DNA polimerases de High fidelity P e Q ficaram abaixo do limite de detecção para o método usado. Este limite é estimado em 8.4 x 10-6 erros por base por duplicação (60 x fidelidade Taq).
Amplificação de Longo Alcance:
- A AQ97 High Fidelity DNA Polymerase permite a amplificação de amplicons grandes e complexos.
- Seis alvos diferentes de DNA genômico humano variando de 2 kb e até 17,5 kb foram usados neste estudo.
- Os tamanhos do amplicon são indicados na parte superior do gel.
- O marcador M é High Range DNA Ladder da Ampliqon.
Amplificação Robusta:
- O desempenho do AQ97 High Fidelity foi comparado a três principais DNA polimerase High fidelity (Q, S e P).
- Oito diferentes alvos de DNA genômico humano, com 400-800 bp de comprimento e com conteúdo de GC variando de 29-78%, foram amplificados.
- A amplificação robusta foi observada para todos os alvos usando AQ97 High Fidelity DNA Polymerase.
- A DNA polimerase high fidelity Q e S fornecem resultados muito semelhantes à AQ97 High Fidelity, exceto no último alvo com o maior conteúdo de GC de 78%. Ao contrário, a DNA polimerase High Fidelity P não foi capaz de fornecer o mesmo nível de amplificação robusta nos alvos de DNA com maior conteúdo de GC, nas condições testadas aqui.
- Os estudos de amplificação foram configurados, conforme recomendado pelos fabricantes. Calculadoras de Tm dos respectivos concorrentes foram usadas para calcular as temperaturas de ideal de amplificação para os primers.
- Ao amplificar alvos ricos em GC, foram incluídos na mistura de reação solução 2 M Betaine Enhancer Solution (AQ97 DNA Polymerase), GC enhancer (Competidor Q e S) ou tampão de PCR específico rico em GC (competidor P).