Ágar Chocolate- Guia Técnico, preparação e uso.

Você conhece o Ágar Chocolate? Qual a importância desse meio de cultura?

A microbiologia, a ciência que estuda os micro-organismos, depende de meios de cultura específicos para isolar, crescer e estudar esses minúsculos seres. Um desses meios, amplamente utilizado em laboratórios clínicos, é o ágar chocolate. Mas, ao contrário do que o nome pode sugerir, não tem nada a ver com o delicioso doce. Vamos mergulhar no fascinante mundo desse meio de cultura!

O Que é  Ágar Chocolate?

O ágar chocolate é um tipo de meio de cultura utilizado em laboratórios de microbiologia. O nome pode sugerir algo delicioso, mas na verdade, é assim chamado devido à sua coloração marrom, que lembra chocolate. A cor é obtida após o aquecimento do sangue até que os glóbulos vermelhos se rompam, um processo conhecido como hemólise.

Este meio é uma variação do ágar sangue, que é enriquecido com nutrientes adicionais e subprodutos do sangue hemolisado. A presença desses componentes faz do Ágar Chocolate um meio de cultura altamente nutritivo, ideal para o crescimento de uma ampla variedade de bactérias, incluindo aquelas que são fastidiosas, ou seja, mais exigentes em termos nutricionais.

O ágar chocolate preparado internamente é o ágar de sangue modificado que é aquecido para lisar as hemácias. A lise de eritrócitos libera nutrientes intracelulares como hemoglobina, hemina (fator X) e a coenzima nicotinamida adenina dinucleotídeo (NAD ou fator V) no ágar para utilização por bactérias exigentes.

A peptona fornece ao organismo nitrogênio, aminoácidos e outros elementos essenciais para o crescimento, o cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico, o ágar atua como agente solidificante.

Preparação do Ágar Chocolate

Ingredientes:

• Base de Ágar sangue ou um ágar nutritivo similar.
• Sangue de cavalo, ovelha ou coelho.

Passos:

1. Aquecimento: O sangue é aquecido a 56°C durante uma hora, resultando na hemólise das células sanguíneas, o que dá ao meio a sua característica cor marrom.
2. Mistura: Adicione o sangue hemolisado à base do ágar nutritivo.
3. Autoclavagem: Após a mistura, o meio é esterilizado em autoclave a 121°C durante 15 minutos.
4. Solidificação: Após a autoclavagem, permita que o meio esfrie e solidifique em placas de Petri.

Como usar o Ágar Chocolate:

1. Coleta e Semeadura: Coleta-se uma amostra clínica do local de interesse (por exemplo, uma zaragatoa de garganta) e semeia-se no Ágar Chocolate.
2. Incubação: As placas são então incubadas em uma atmosfera rica em CO₂, geralmente a 35-37°C por 24-48 horas.
3. Observação: Após o período de incubação, verifique o crescimento bacteriano. As bactérias patogênicas terão características distintas que podem ser identificadas com base na aparência, cor e tamanho das colônias.
4. Testes Adicionais: Se necessário, faça testes bioquímicos adicionais para confirmar a identidade da bactéria.

Composição do Ágar Chocolate

A composição do ágar chocolate pode variar ligeiramente dependendo do fabricante e do protocolo específico, mas geralmente contém os seguintes componentes básicos:

1. Base de Ágar Sangue: Geralmente, o ágar chocolate utiliza uma base de ágar sangue, que é ágar enriquecido com sangue. O sangue é tipicamente de origem ovina ou equina.
2. Sangue Hemolisado: O componente mais característico do ágar chocolate é o sangue que foi hemolisado (ou seja, os glóbulos vermelhos foram destruídos) pelo aquecimento. Este processo libera fatores de crescimento como hemina (fator X) e NAD (fator V), essenciais para o crescimento de certos patógenos.
3. Nutrientes: O meio contém nutrientes básicos que suportam o crescimento bacteriano, incluindo peptonas (fontes de nitrogênio e vitaminas), sais e, às vezes, glicose ou outros carboidratos para fornecer uma fonte de energia.
4. Indicadores de pH: Alguns tipos de ágar chocolate podem conter indicadores de pH que ajudam a identificar certos tipos de bactérias com base nas alterações de pH que elas causam no meio.
5. Suplementos Opcionais: Dependendo do uso específico, podem ser adicionados antibióticos ou outros suplementos para inibir o crescimento de microrganismos indesejados e favorecer o crescimento dos organismos de interesse.

O ágar chocolate é utilizado para cultivar uma ampla gama de bactérias, especialmente aquelas que requerem fatores de crescimento adicionais, como Haemophilus spp. e Neisseria spp. Após a inoculação e incubação, as colônias bacterianas podem ser observadas e submetidas a testes adicionais para identificação.

Usos do Ágar chocolate

O ágar chocolate é amplamente utilizado em laboratórios de microbiologia para diversas finalidades, especialmente devido à sua capacidade de suportar o crescimento de bactérias exigentes. Aqui estão alguns dos principais usos do ágar chocolate:

1. Cultivo de Bactérias Exigentes: O ágar chocolate é especialmente útil para o cultivo de bactérias que requerem fatores de crescimento adicionais, como Haemophilus influenzae e Neisseria gonorrhoeae. Estas bactérias não crescem bem em meios de cultura comuns, mas se desenvolvem no ágar chocolate devido à presença de fatores de crescimento liberados pelo sangue hemolisado.
2. Diagnóstico de Infecções Respiratórias: É frequentemente usado para isolar e identificar patógenos associados a infecções respiratórias, como pneumonia e bronquite.
3. Diagnóstico de Doenças Sexualmente Transmissíveis (DSTs): Neisseria gonorrhoeae, o agente causador da gonorreia, é frequentemente isolada utilizando ágar chocolate.
4. Isolamento de Patógenos em Amostras Clínicas: Utilizado para isolar bactérias a partir de uma variedade de amostras clínicas, incluindo sangue, secreções respiratórias, swabs de garganta e nariz, e amostras genitais.
5. Pesquisa em Microbiologia: Além do uso clínico, o ágar chocolate é usado em pesquisas para estudar as características de crescimento, morfologia e outras propriedades biológicas de bactérias exigentes.
6. Testes de Sensibilidade a Antibióticos: Pode ser usado para realizar testes de sensibilidade, observando como diferentes bactérias reagem a vários antibióticos.
7. Identificação Bacteriana: Após o crescimento no ágar chocolate, as bactérias podem ser submetidas a uma série de testes bioquímicos e morfológicos para sua identificação precisa.

Em resumo, o ágar chocolate é um meio de cultura extremamente versátil e valioso na microbiologia, essencial para o diagnóstico e pesquisa de uma variedade de organismos bacterianos.

Limitações do Ágar chocolate

1. Como o ágar chocolate é um meio enriquecido, ele se contamina com muita facilidade.
2. O uso de ágar chocolate apenas dificulta a diferenciação de organismos não patogênicos de patogênicos, uma vez que os primeiros supercrescem bactérias patogênicas.
3. O ágar chocolate tem uma concentração reduzida de ágar, de modo que a superfície do prato é frágil e propensa a arranhões durante a formação de estrias.

Embora seu nome possa evocar imagens de sobremesas e doces indulgências, o Ágar Chocolate é um componente crítico para a microbiologia médica e pesquisa. Ele desempenha um papel vital no diagnóstico de doenças, no desenvolvimento de novos medicamentos e na compreensão fundamental de patógenos que afetam a saúde humana. Ao fornecer um ambiente propício para o crescimento de organismos exigentes, o Ágar Chocolate nos ajuda a desvendar mistérios microscópicos que têm impactos macroscópicos em nossa sociedade.

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